本发明属于微生物除草剂领域，特别涉及一种从化感水稻土壤中筛选的抑草真菌，已于2013年11月27日在中国典型培养物保藏中心登记保藏，保藏编号为CCTCC NO:M2013614。用莴苣为受体的生测结果表明：该菌株发酵液对刚冒芽的莴苣的根长和株高的抑制率都是100%；菌液稀释10倍后对莴苣根长的抑制率达80.35%，对莴苣株高的抑制率为65.56%。用刚冒芽的稗草为受体的生测结果表明：该菌株对稗草株高的抑制率为72.11%，对稗草株高的抑制率为100%。并把该菌株命名为ZQ001，通过对该菌株的形态学和18S rDNA序列分析鉴定结果都表明该菌株为<i>Penicillium decumbens</i>（斜卧青霉）中的一员，为首次从化感水稻土壤中筛选强抑草真菌斜卧青霉（<i>Penicillium decumbens</i>）。
1.一种从化感水稻土壤中筛选的抑草真菌，其特征在于：该真菌为斜卧青霉（Penicilliumdecumbens）ZQ001，已于2013年11月27日在中国典型培养物保藏中心登记保藏，保藏编号为CCTCCNO:M2013614。
2.一种如权利要求1所述的一种从化感水稻土壤中筛选的抑草真菌作为真菌除草剂的应用。技术领域
本发明是属于微生物除草剂领域，特别涉及一种从化感水稻土壤中筛选抑草真菌及其应用。
背景技术
微生物除草剂是一类用于防治杂草的植物病原菌生物制剂，其重要的有效成分是活的微生物。到目前为止，大多数的微生物除草剂使用的是活的真菌繁殖体。目前已经注册的真菌除草剂有，1981年美国伊利诺伊实验室Abott注册的Devine。它是棕榈疫病霉制剂，适用于柑橘园来防治莫伦藤，可以达到防治率的96%，并且可以持续2年；1982年美国的阿肯色州大学和Upjohn公司共同开发的College，它是长盘孢刺盘孢合萌专化型制剂，适用于水稻田和大豆田里，防治率达90%以上；1992年加拿大Philombios开发的Biomal；1997年荷兰Kopper公司生产的Biochon；1989年以后，菲律宾也进行了真菌除草剂的开发和研究，他们主要针对的是对水稻田杂草，我国早在1963年时，由山东农科院在济南从催病的大豆菟丝子上分离到一株可以侵染致病的真菌，并被命名为“鲁保一号”，推广应用面积达60万km2，防治率达85%以上。在1979年，新疆的哈密植检站获得一株具有高仿防治率的镰刀菌（Fusariumorobanches），该菌株是从自然感病的埃及列当植株中分离得到的。在我国许多的大学和研究所都筛到了具有强防治率的菌株，我国的微生物除草剂也在不断的发展。然而在国内外，尚未报道过Penicilliumdecumbens具有除草作用。通过本研究所筛到的真菌，为后续的微生物除草剂的开发做好铺垫。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从化感水稻土壤中筛选的抑草真菌及其应用，该菌株可作为真菌除草剂，具有很强的抑草作用，有良好的市场应用前景。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：该真菌为斜卧青霉ZQ001，已于2013年11月27日在中国典型培养物保藏中心登记保藏，保藏编号为CCTCCM2013614。该真菌可作为真菌除草剂，是先通过用菌株的发酵液来处理莴苣，来初步筛选具有抑草作用的真菌，再把有抑制作用的菌株的发酵液稀释10倍后处理莴苣，来筛到有强抑制作用的菌株。再根据前面的结果以稗草为受体做生测，来进一步确定菌株的抑草强度。所述菌株是从从化感水稻土壤中筛选的，该菌株的形态特征、培养特性、ITS1-5.8SrDNA-ITS2序列和菌种分类结果如下：菌株表面深绿色，边缘白色，致密无同心环，质地呈毡状，底部黄白色，表面无渗出物。镜检结果显示营养菌丝,有分生孢子梗和分生孢子，菌丝有隔，初步推断该分离菌株是靑霉属。菌株18SrDNA测序结果显示，其序列大小为1416bp，通过与NCBI（Blast）中的数据进行同源性比较，该菌株与Penicilliumdecumbens的序列相似率达99%以上，推断该菌株是Penicilliumdecumbens（斜卧青霉）。本发明的优点在于：提供一种从化感水稻土壤中筛选的抑草真菌及其作为微生物除草剂的应用，该菌株可作为真菌除草剂，具有很强的抑草作用，有良好的市场应用前景，为后续的微生物除草剂的开发做好铺垫。
附图说明
图1为菌株发酵液处理3天后的莴苣。图2为菌株发酵液稀释10倍后处理3天后的莴苣。其中1:对照；2：菌株发酵液稀释10倍后处理的莴苣。图3为菌株处理3天后的稗草。其中1:对照；2：菌株发酵液后处理的稗草。
具体实施方式
实施例11、实验方法1.1、菌株的发酵液的抑草能力微生物测试——莴苣在组培瓶中放一张滤纸，别取5mL发酵液和稀释10倍的发酵液加入到组培瓶中，每个组培瓶中播入5粒刚冒白的莴苣，蒸馏水做对照，并将其置28℃恒温培养箱中培养，每个实验设置3次重复。培养3d后测定稗草的根长和株高。抑制率计算按公式：IR=（1-TR/CK）×100%。其中，IR：抑制率(Inhibitionrate)；TR：处理(Treatment)；CK：对照(Control)。1.2、菌株的发酵液的抑草能力微生物测试——稗草在组培瓶中放一张滤纸，别取5mL发酵液加入到组培瓶中，每个组培瓶中播入5粒刚冒白的稗草，蒸馏水做对照，并将其置28℃恒温培养箱中培养，每个实验设置3次重复。培养3d后测定稗草的根长和株高。抑制率计算按公式：IR=（1-TR/CK）×100%。其中，IR：抑制率(Inhibitionrate)；TR：处理(Treatment)；CK：对照(Control)。1.3、菌株形态学鉴定1.3.1菌落的形态学观察在PDA固体培养基平板中间接入用直径0.8cm的打孔器打下的菌饼，28℃连续培养7d，在这7d里明天都要观察菌落边缘和表面的质地、颜色纹饰等形态特征。1.3.2显微镜形态观察将在在PDA固体培养基平板上培养3d的菌落用解剖针挑出一点菌落，放在中间滴有无菌水的载玻片上，然后用两只解剖针尽量的把菌落分散开，盖上盖玻片，用吸水纸把载玻片周围的水吸干，在光学显微镜下观察分生孢子梗和孢子等形态。1.3.3形态学鉴定形态学鉴定依据菌落的特征，根据魏景超的《真菌鉴定手册》和C.J.Alexpoulos的IntroductoryMycology对菌株进行初步的鉴定。1.4、分子生物学方法鉴定按常规方法提取该真菌的基因组DNA，利用设计的针对18SrDNA引物进行PCR扩增，所用引物序列为：NS1：5’–GTAGTCATATGCTTGTCTC-3’；NS6：5’-GCATCACAGACCTGTTATTGCCTC3’；PCR扩增条件：预变性94℃3min，循环94℃25s，55℃25s，72℃1min，30个循环，然后在72℃，修复延伸10min。将18SrDNAPCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，将PCR扩增产物经胶回收纯化后克隆到T载体上，随机挑取10个单菌落摇菌后进行鉴定，随机选择3份经鉴定为阳性的重组质粒送由上海生工生物工程技术服务有限公司进行序列测定，利用DNAStar进行序列拼接，并在NCBI中进行Blast分析。2、实验结果：2.1、莴苣生测ZQ001菌株发酵液在没有稀释时对莴苣根长和株高的抑制率都是100%（附:图1），当发酵液稀释10倍时，对莴苣根长和株高的抑制率分别是80.35%和65.56%（表1），说明该菌株对莴苣具有强的抑制作用。表1ZQ001菌株发酵液稀释10倍后对莴苣的影响ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="593"/>2.2、稗草生测从表2可以看出，ZQ001菌株发酵液对稗草稗草株高的抑制率为72.11%，对稗草株高的抑制率为100%。这说明该菌株对稗草具有很强的抑制作用。表2ZQ001菌株发酵液对发稗草生长的影响ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="593"/>2.3、菌株鉴定形态学鉴定结果：菌株表面深绿色，边缘白色，致密无同心环，质地呈毡状，底部黄白色，表面无渗出物。镜检结果显示营养菌丝,有分生孢子梗和分生孢子，菌丝有隔。初步推断该分离菌株是靑霉属。菌株18SrDNA测序结果显示，其序列大小为1416bp，通过与NCBI（Blast）中的数据进行同源性比较，该菌株与Penicilliumdecumbens的序列相似率达99%以上，推断该菌株是Penicilliumdecumbens（斜卧青霉）。通过形态学和18SrDNA鉴定结果表明该菌株是Penicilliumdecumbens（斜卧青霉）中的一种。以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。